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从转子上小心拿开离心管

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从转子上小心拿开离心管

发布日期:2020-10-16 作者: 点击:

使用此独特的转子非常有必要。341 650g (Optima L-90K超速离心机),18C离心至少8h。可过夜离心。

1. 从转子上小心拿开离心管,注意不要破坏梯度。用23G针头在离心管顶部穿孔。用长波紫外线,用一个斜面向上的18G针头小心移除发光的DNA条带。通常会有两条带。选择底部的条带。

上面的条带是降解的DNA,而底下的条带是完整的环状BACDNA。被移除的条带的体积大约为200uL。不要取液超过200uL,不然你将得到-部分顶部降解的条带。转移DNA到一个15mL的Falcon管,用1XTE缓冲液补足总体积到2mL。

2.加入等体积的NaCl饱和丁醇到DNA溶液中,轻轻混合。静置混合物30s,使其分离。移除并丢弃上层。抽提溶液4~5次,直到不再有粉红色。

3.转移DNA溶液到一个30mL圆底离心管中,加入1lmL dH2O到溶液中,接着加入2.5~3.0体积的100%乙醇。混合并在- 20'C温育30min。16 417g, 4'C 离心溶液30min以沉淀DNA (J-25I Beckman Avanti 离心机,JA-25.50 转子)。

4.倒掉乙醇,重悬DNA于0.5 mL的0.3 mol/L乙酸钠中。转移溶液到一个1.5mL微量离心管中,加入1mL 100%乙醇。用微型离心机,20 617g, 4'C 离心溶液30min。

▲因为BAC DNA对剪切力敏感,应该使用带有宽孔吸头的移液器来转移DNA。


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